液相色譜儀是屬于易學難用的儀器，特別講究“正確使用"和經驗。
液相工作者接觸最多的是流動相，也就是流動相，是造成液相色譜各種問題的最主要源頭。
液相色譜儀最常見的故障一是堵，二是漏。下面就這兩點分別展開討論。（注：流動相以甲醇為例，色譜柱以C18為例）“堵"的表現現象就是柱壓異常升高，直接原因就是流路不暢。堵塞的主要位置就是在色譜柱的前端，

最主要原因就是流動相里有雜質，雜質的主要來源就是細菌。
“堵"的原因之一：配制流動相時細菌污染。
首先我們要認識到，一般的國產甲醇其實不需要額外過濾處理，直接使用沒有問題。即使是有些固態(tài)微粒雜質，也能在液相流路系統(tǒng)最前端的過濾頭上排除，真正容易引起問題的，是水中的細菌。新制備的純水在室內放置幾天就會長菌，而這些細菌雖然肉眼不可見，卻足以堵塞柱填料顆粒的空隙，造成柱子很快報廢。

時間過久,濾頭黏附細菌導致泵液不準

 

解決它的方法很簡單，就是確保水的可靠性。這里有兩種方式推薦：
（1）購買實驗室專用純水機，

既方便又可靠，質量也放心。缺點就是價格不菲。
（2） 成箱購買市售品牌純凈水，如500ml 一支的怡寶或娃哈哈，這些水的質量足以應付液相色譜的要求。

這里特別指出一個細節(jié)：在絕大多數書本上，凡談到配制流動相都會談到最后有一個過濾的步驟。

從使用的實際情況來看有幾點需要注意:
（1）流動相過濾實際操作時由于不可能做到專瓶專用，容易造成的交叉污染，對于配比復雜的流動相影響更大。所以用完后一定要沖洗干凈.用前不放心的話也可以沖洗下.

（2）流動相過濾經濟成本比較高。買一套過濾裝置要3000多元，且過濾器是比較容易損壞的設備。過濾片成本高，有些進口的一片就要幾十元。按一般液相柱的正常使用壽命計算，過濾片的成本會遠遠高于色譜柱的成本。并且在使用過濾片時,有些會造成流動相的二次污染,原因在于不合格的過濾片.
（3）流動相過濾耗費時間長。使用溶劑過濾器有一個預清洗、裝備、使用、用后清洗，晾干的過程，至少也有一個小時的時間。這個成本也不能忽視。

“堵"的原因之二：使用流動相時的細菌污染。
指的是：流動相剛開始沒有長菌，在使用時卻產生了細菌污染。這主要是在使用多元液相色譜儀時的一種不良使用習慣造成的。
舉例子：50％的甲醇水流動相，有兩種使用方式。一種方式是在上機前就配好混合在一起，另一種方式是在流路A放純甲醇，流路B放純水。
從單純實驗效果來說，后一種有明顯的優(yōu)點：首先是簡單，不需要實驗者另個計算配比混合，其次就是比例準確，能得到保留時間重復性的實驗效果。
但是，它有一個致命的缺陷，就是純水在流動相瓶中幾天時間就會長細菌（很多情況下不僅僅用純水作流動相，而是用緩沖鹽溶液，本身就是優(yōu)質肥料，細菌長得更迅速），一旦有細菌柱子就壞得很快。所以這種方式要求操作人員每次實驗都要用新制備的純水，更要求在每次實驗后把水相換掉，換成甲醇沖洗干凈，這一點在實際工作中很多人意識不強，就是意識到了但多次使用中總有一兩次會遺漏，但是往往這一兩次就足以產生致命的影響。因為液相色譜柱的堵塞是不可逆的。
"堵"的原因之三：不適當操作。
常見問題的有以下幾種：
（1）在更換零件時選擇的型號有誤，或者管線材質不達標,接口不是很匹配，在擰緊的時候產生變形而使得管路堵塞。
（2）樣品處理液凈化得不干凈，長期會在六通閥和柱之間形成阻塞不暢。
（3）在使用手動六通閥時，有些人可能由于手勁小的原因，轉動的不到位，于是造成流路形成了死堵，壓力快速升高超過警戒值.自動進樣的情況類似,若六通閥卡死,也會形成死堵,導致超壓           

  
“堵"的原因講了不少，現介紹查堵的方法。
在發(fā)生“堵"的現象后，就需要找出原因，主要是什么位置發(fā)生了“堵"。注意，絕大多數情況下，整個系統(tǒng)只會有一個地方發(fā)生堵塞。
查堵的方法是從尾向前逆向分段拆開，仔細觀察壓力數值，如果某一個部件（柱子除外）裝上和拆下時的壓力差別很大，即基本可以判定此配件堵塞。至于柱的堵塞，可以通過換同樣規(guī)格的柱的壓力是否一致來判斷。建議首先更換柱子,看壓力是否依然很大.然后是柱前管線,依次往前排查
下面再談一下“漏"的問題。
液相色譜儀從流動相瓶到廢液瓶之間的流路是一個全封閉體系，內部壓力很高，但外部卻能保證一滴不漏。如果某個部件發(fā)生了漏液，那就是故障所在。
漏液的原因分兩種：
（1） 接觸硬件不當。
在更換零件如流路管或柱子時，換的接頭接口不匹配，造成漏液。要注意不同公司的柱子接頭很多是不同的。當然選用PEEK接頭是一個較好的解決方法，不僅通用性好，而且靠手擰就能保證不漏液。值得注意的是現在有很多廠家都出了手擰管線,只能用手擰,用扳手力量過大會造成損壞.所以要把握好力度,避免擰的太緊或太松.

螺紋沒有對好,用力過大形變導致漏夜

形變導致漏夜

  

（2） 使用儀器不當
如果是輸送泵漏液，最常見的原因就是在活塞位置緩沖鹽析出造成。

之間有液體漏出

轉子磨損

      

析出的原因有兩個，一是使用緩沖鹽溶液時突然加入了純甲醇而析出，這種錯誤很容易避免，在使用儀器時要注意目前系統(tǒng)的流動相是什么，如果是緩沖鹽，不能直接換純有機相，會導致鹽析出，引起系統(tǒng)，色譜柱堵塞。需要先用10%的有機相水過度。再換純有機相。另一原因是在用緩沖鹽溶液（不論甲醇含量有多少）作流動相時，實驗結束后沒有換甲醇水沖洗，使得微滲的流動相干燥形成晶體造成。為了避免此種現象出現，在使用緩沖鹽做流動相后一定要先用90%的水,1ml/min 的流速來沖洗系統(tǒng)至少30分鐘，把緩沖鹽置換出去，再用純有機相沖洗30分鐘，把系統(tǒng)保存在純有機相中，起到保護系統(tǒng)和柱子的作用。

    在實際的使用過程中，試驗人員往往很忙，有大量的項目要做，沒時間沖洗儀器，都是拿過來就用，用完就不管了，導致問題的出現，然后排查，維修等浪費更多的時間，得不償失。所謂磨刀不誤砍柴功，工欲善其事，必先利其器。希望大家都能培養(yǎng)良好的使用習慣，讓儀器設備能發(fā)揮出最大的作用，謝謝大家！